सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस (२) प्रयोग गर्दा धेरै विचारहरू दिमागमा राख्नु पर्छ।

हामीले गत हप्ता सेलुलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग गर्नका लागि धेरै विचारहरू साझा गरेका थियौं, र हामी तपाईंको सन्दर्भको लागि आज यहाँ यो विषय समाप्त गर्नेछौं।

को चयन बफर एकाग्रता

सेलुलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा प्रयोग हुने बफर एकाग्रता सामान्यतया पेपर इलेक्ट्रोफोरेसिसमा प्रयोग गरिएको भन्दा कम हुन्छ। सामान्यतया प्रयोग हुने pH 8.6Bआर्बिटल बफर सामान्यतया 0.05 mol/L देखि 0.09 mol/L को दायरा भित्र छनोट गरिन्छ। एकाग्रता चयन गर्दा, प्रारम्भिक निर्धारण गरिन्छ। उदाहरणका लागि, यदि इलेक्ट्रोफोरेसिस चेम्बरमा इलेक्ट्रोडहरू बीचको झिल्ली पट्टीको लम्बाइ 8-10 सेन्टिमिटर छ भने, झिल्ली लम्बाइको प्रति सेन्टिमिटर 25V को भोल्टेज आवश्यक छ, र हालको तीव्रता झिल्ली चौडाइको 0.4-0.5 mA प्रति सेन्टिमिटर हुनुपर्छ। यदि यी मानहरू इलेक्ट्रोफोरेसिसको समयमा प्राप्त भएन वा बढी भएन भने, बफर एकाग्रता बढाउन वा पातलो हुनुपर्छ।

अत्यधिक कम बफर एकाग्रताले ब्यान्डहरूको द्रुत गति र ब्यान्ड चौडाइमा वृद्धिको परिणाम दिन्छ। अर्कोतर्फ, अत्यधिक उच्च बफर एकाग्रताले ब्यान्ड माइग्रेसनलाई सुस्त पार्छ, यसले निश्चित विभाजन ब्यान्डहरू छुट्याउन गाह्रो बनाउँछ।

यो ध्यान दिनुपर्छ कि सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा, वर्तमानको एक महत्त्वपूर्ण भाग नमूना मार्फत सञ्चालन गरिन्छ, जसले पर्याप्त मात्रामा गर्मी उत्पन्न गर्दछ। कहिलेकाहीँ, छानिएको बफर एकाग्रता उपयुक्त मान्न सकिन्छ। यद्यपि, बढेको वातावरणीय तापक्रम वा उच्च भोल्टेज प्रयोग गर्दा, गर्मीको कारण पानीको वाष्पीकरण तीव्र हुन सक्छ, परिणामस्वरूप अत्यधिक उच्च बफर एकाग्रता र झिल्ली सुक्न पनि निम्त्याउँछ।

नमूना मात्रा

सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा, नमूना भोल्युमको मात्रा इलेक्ट्रोफोरेसिस अवस्थाहरू, नमूनाको गुणहरू, दाग लगाउने विधिहरू, र पत्ता लगाउने प्रविधिहरू सहित विभिन्न कारकहरूद्वारा निर्धारण गरिन्छ। सामान्य सिद्धान्तको रूपमा, पत्ता लगाउने विधि जति संवेदनशील हुन्छ, नमूना भोल्युम जति सानो हुन्छ, जुन विभाजनको लागि फाइदाजनक हुन्छ। यदि नमूना मात्रा अत्यधिक छ भने, इलेक्ट्रोफोरेटिक विभाजन ढाँचाहरू स्पष्ट नहुन सक्छ, र दाग पनि समय-उपभोग हुन सक्छ। यद्यपि, इल्युसन कलरमेट्रिक पत्ता लगाउने विधिहरू प्रयोग गरेर अलग गरिएको दाग ब्यान्डहरूलाई मात्रात्मक रूपमा विश्लेषण गर्दा, नमूना भोल्युम धेरै सानो हुनु हुँदैन, किनकि यसले निश्चित कम्पोनेन्टहरूको लागि कम अवशोषण मानहरू निम्त्याउन सक्छ, जसले तिनीहरूको सामग्री गणनामा उच्च त्रुटिहरू निम्त्याउँछ। यस्तो अवस्थामा, नमूना मात्रा उचित रूपमा वृद्धि गर्नुपर्छ।

सामान्यतया, नमूना आवेदन लाइनको प्रत्येक सेन्टिमिटरमा थपिएको नमूना भोल्युम 0.1 देखि 5 μL सम्म हुन्छ, 5 देखि 1000 μg को नमूना रकम बराबर। उदाहरणका लागि, नियमित सीरम प्रोटीन इलेक्ट्रोफोरेसिस विश्लेषणमा, एप्लिकेसन लाइनको प्रत्येक सेन्टिमिटरमा थपिएको नमूना भोल्युम सामान्यतया 1 μL भन्दा बढी हुँदैन, प्रोटीनको 60 देखि 80 μg बराबर। यद्यपि, एउटै इलेक्ट्रोफोरेसिस विधि प्रयोग गरेर लिपोप्रोटिन वा ग्लाइकोप्रोटिनहरूको विश्लेषण गर्दा, नमूनाको मात्रा समान रूपमा वृद्धि गर्न आवश्यक छ।

निष्कर्षमा, प्रारम्भिक प्रयोगहरूको श्रृंखला मार्फत विशेष अवस्थाहरूमा आधारित सबैभन्दा उपयुक्त नमूना भोल्युम चयन गर्नुपर्छ।

दाग समाधान को चयन

सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा विभाजित ब्यान्डहरू पत्ता लगाउनु अघि सामान्यतया दाग हुन्छन्। विभिन्न नमूना कम्पोनेन्टहरूलाई बिभिन्न स्टेनिङ विधिहरू चाहिन्छ, र सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसका लागि उपयुक्त दाग विधिहरू फिल्टर पेपरमा पूर्ण रूपमा लागू नहुन सक्छ।

स्टेनिङ समाधान चयन गर्न तीन प्रमुख सिद्धान्तहरू छन्सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली। सर्वप्रथम,पानीमा घुलनशील रङहरूलाई अल्कोहल-घुलनशील रङहरू भन्दा प्राथमिकता दिनु पर्छ जुन पछिको दागको समाधानको कारणले गर्दा झिल्ली संकुचन र विकृतिबाट बच्न सकिन्छ। दाग पछि, झिल्लीलाई पानीले कुल्ला गर्न र दागको अवधिलाई कम गर्न महत्त्वपूर्ण छ। अन्यथा, झिल्ली कर्ल्ड वा संकुचित हुन सक्छ, जसले पछिको पहिचानलाई असर गर्नेछ।

दोस्रो, यो नमूनाको लागि बलियो दाग सम्बन्धको साथ रंगहरू चयन गर्न राम्रो छ। सीरम प्रोटीनको सेलुलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा, एमिनो ब्ल्याक 10B सामान्यतया प्रयोग गरिन्छ किनभने विभिन्न सीरम प्रोटीन कम्पोनेन्टहरू र यसको स्थिरताको लागि यसको बलियो दाग सम्बन्धको कारण।

तेस्रो, भरपर्दो गुणस्तर रङहरू छनौट गर्नुपर्छ। एउटै नाम भए तापनि केही रङहरूमा अशुद्धताहरू हुन सक्छन् जसले दाग लागेपछि विशेष गरी कालो पृष्ठभूमिमा परिणाम दिन्छ। यसले मूल रूपमा राम्रोसँग छुट्याइएको ब्यान्डहरूलाई पनि धमिलो पार्न सक्छ, तिनीहरूलाई छुट्याउन गाह्रो बनाउँछ।

अन्तमा, दाग समाधान एकाग्रता को छनौट महत्त्वपूर्ण छ। सैद्धान्तिक रूपमा, यस्तो लाग्न सक्छ कि एक उच्च दाग समाधान एकाग्रता नमूना घटक र राम्रो दाग परिणाम को अधिक पूर्ण दाग को नेतृत्व गर्नेछ। यद्यपि, यो मामला होइन। नमूना घटक र डाई बीच बाध्यकारी आत्मीयता एक निश्चित सीमा छ, जो दाग समाधान एकाग्रता मा वृद्धि संग बढ्दैन। यसको विपरित, अत्यधिक उच्च दाग समाधान एकाग्रताले डाईलाई बर्बाद मात्र गर्दैन तर स्पष्ट पृष्ठभूमि प्राप्त गर्न पनि गाह्रो बनाउँछ। यसबाहेक, जब रङको तीव्रता निश्चित अधिकतम मानमा पुग्छ, डाईको अवशोषण वक्रले रैखिक सम्बन्धलाई पछ्याउँदैन, विशेष गरी मात्रात्मक मापनहरूमा। सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसमा, दागको समाधान एकाग्रता सामान्यतया कागज इलेक्ट्रोफोरेसिसमा प्रयोग गरिएको भन्दा कम हुन्छ।

Beijing Liuyi बायोटेक्नोलोजी बारे जान्नको लागि विवरणहरू's सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीइलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक र यसको इलेक्ट्रोफोरेसिस आवेदन, कृपया यहाँ जानुहोस्:

lसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली द्वारा सीरम प्रोटीन अलग गर्न को लागी प्रयोग

lसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस

lसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस (१) प्रयोग गर्दा धेरै विचारहरू दिमागमा राख्नु पर्छ।

यदि तपाईंसँग हाम्रा उत्पादनहरूको लागि कुनै खरिद योजना छ भने, कृपया हामीलाई सम्पर्क गर्न नहिचकिचाउनुहोस्। तपाईले हामीलाई इमेलमा सन्देश पठाउन सक्नुहुन्छ[इमेल सुरक्षित]वा[इमेल सुरक्षित], वा कृपया हामीलाई +86 15810650221 मा कल गर्नुहोस् वा Whatsapp +86 15810650221, वा Wechat: 15810650221 थप्नुहोस्।

सन्दर्भ:श्री ली द्वारा इलेक्ट्रोफोरेसिस (दोस्रो संस्करण)