हेमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसिस प्रयोग

प्रयोग सिद्धान्त

हेमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसिसले विभिन्न सामान्य र असामान्य हेमोग्लोबिनहरू पत्ता लगाउन र पुष्टि गर्ने लक्ष्य राख्छ।

विभिन्न हेमोग्लोबिन प्रकारका विभिन्न चार्जहरू र आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दुहरूका कारण, एक निश्चित pH बफर समाधानमा, जब हेमोग्लोबिनको आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दु बफर समाधानको pH भन्दा कम हुन्छ, हेमोग्लोबिनले नकारात्मक चार्ज बोक्छ र इलेक्ट्रोफोरेसिसको बेला एनोड तिर माइग्रेट गर्छ। यसको विपरीत, सकारात्मक चार्ज भएको हेमोग्लोबिन क्याथोड तर्फ सर्छ।

एक निश्चित भोल्टेज अन्तर्गत र एक विशिष्ट इलेक्ट्रोफोरेसिस समय पछि, विभिन्न चार्ज र आणविक वजन भएका हेमोग्लोबिनहरूले विभिन्न स्थानान्तरण दिशाहरू र गतिहरू प्रदर्शन गर्छन्। यसले फरक क्षेत्रहरूलाई छुट्याउन अनुमति दिन्छ, र विभिन्न हेमोग्लोबिनहरू परिमाण गर्न यी क्षेत्रहरूमा पछिको कलरमेट्रिक वा इलेक्ट्रोफोरेटिक स्क्यानिङ विश्लेषण गर्न सकिन्छ। सबैभन्दा सामान्य रूपमा प्रयोग गरिएको विधि pH 8.6 सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस हो।

साइटोप्लाज्म भित्र, ग्लाइकोजेन वा पोलिसेकेराइड पदार्थहरू (जस्तै म्यूकोपोलिसेकराइडहरू, म्यूकोप्रोटिनहरू, ग्लाइकोप्रोटिनहरू, ग्लाइकोलिपिडहरू, इत्यादि) मा उपस्थित इथिलीन ग्लाइकोल समूहहरू (CHOH-CHOH) आवधिक एसिडद्वारा अक्सिडाइज हुन्छन् र एल्डिहाइड समूहहरू (CHOH-CHOH) मा परिणत हुन्छन्। यी एल्डिहाइड समूहहरू रंगहीन बैजनी-रातो शिफ अभिकर्मकसँग मिल्छ, बैजनी-रातो रङ बनाउँछ जुन कोशिकामा पोलिसेकराइडहरू अवस्थित हुन्छन्। यो प्रतिक्रिया आवधिक एसिड-Schiff (PAS) स्टेनिंग को रूपमा चिनिन्छ, पहिले ग्लाइकोजेन स्टेनिंग को रूप मा उल्लेख गरिएको छ।

प्रयोग विधि

सामग्री:सेलुलोज एसीटेटmemब्रेन, इलेक्ट्रोफोरेसिस उपकरण(DYCP-38C र बिजुली आपूर्ति DYY-6C), सुपीरियर नमूना लोडिङ उपकरण(पिपेट), स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, कलरमेट्रिक क्युवेट्स, बफरहरू।

बफर:

(1) pH 8.6 TEB बफर: 10.29 g Tris, 0.6 g EDTA, 3.2 g बोरिक एसिड, र 1000 ml मा डिस्टिल्ड वाटर थप्नुहोस्।

(२) बोरेट बफर: ६.८७ ग्राम बोराक्स र ५.५६ ग्राम बोरिक एसिडको तौल, र १००० मिलीलीटरमा डिस्टिल्ड वाटर थप्नुहोस्।

प्रक्रिया:

Pहेमोग्लोबिन समाधान को मरम्मत

हेपरिन वा सोडियम साइट्रेट युक्त रगतको 3 मिलीलीटर एन्टीकोगुलेन्टको रूपमा लिनुहोस्। 2000 rpm मा 10 मिनेटको लागि सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस् र प्लाज्मा खारेज गर्नुहोस्। रातो रक्त कोशिकाहरूलाई तीन पटक फिजियोलोजिकल सलाइन (750 rpm, 5 मिनेट सेन्ट्रीफ्युगेशन प्रत्येक पटक) संग धुनुहोस्। 10 मिनेटको लागि 2200 rpm मा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस् र supernatant खारेज गर्नुहोस्। डिस्टिल्ड पानीको बराबर मात्रा थप्नुहोस्, त्यसपछि कार्बन टेट्राक्लोराइडको मात्रा 0.5 गुणा थप्नुहोस्। 5 मिनेटको लागि जोडदार रूपमा हल्लाउनुहोस्, र त्यसपछि प्रयोगको लागि माथिल्लो Hb समाधान सङ्कलन गर्न 10 मिनेटको लागि 2200 rpm मा सेन्ट्रीफ्यूज गर्नुहोस्।

झिल्ली भिजाउने

सेलुलोज एसीटेट झिल्लीलाई 3 सेमी × 8 सेमी नाप्ने स्ट्रिपहरूमा काट्नुहोस्। तिनीहरूलाई pH 8.6 TEB बफरमा पूर्ण रूपमा संतृप्त नभएसम्म भिजाउनुहोस्, त्यसपछि हटाउनुहोस् र फिल्टर पेपरले सुकाउनुहोस्।

स्पटिङ

10 μl हेमोग्लोबिन समाधान ठाडो रूपमा सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली (कुनै छेउ) मा, किनाराबाट करिब 1.5 सेन्टिमिटरमा भेट्टाउन पिपेट प्रयोग गर्नुहोस्।

इलेक्ट्रोफोरेसिस

इलेक्ट्रोफोरेसिस चेम्बरमा बोरेट बफर समाधान हाल्नुहोस्। सेल्युलोज एसीटेट झिल्लीलाई चेम्बरको क्याथोड छेउमा स्पट गरिएको साइडसँग राख्नुहोस्। 200 V मा 30 मिनेटको लागि चलाउनुहोस्।

इलुसन

HbA र HbA2 क्षेत्रहरू काट्नुहोस्, तिनीहरूलाई अलग-अलग परीक्षण ट्यूबहरूमा राख्नुहोस्, र क्रमशः 15 ml र 3 ml आसुत पानी थप्नुहोस्। हेमोग्लोबिनलाई पूर्ण रूपमा एल्युट गर्न बिस्तारै हल्लाउनुहोस्, त्यसपछि मिश्रण गर्नुहोस्.

रंगमिति

इल्युसन समाधानको लागि डिस्टिल्ड वाटर प्रयोग गरेर शोषकलाई शून्य गर्नुहोस् र 415 एनएममा अवशोषण मापन गर्नुहोस्।

गणना

HbA2(%) = HbA2 ट्यूबको अवशोषण / (HbA ट्यूबको अवशोषण × 5 + HbA2 ट्यूबको अवशोषण) × 100%

प्रयोगात्मक परिणाम गणना

pH 8.6 TEB बफर सेल्युलोज एसीटेट इलेक्ट्रोफोरेसिसको लागि सन्दर्भ दायरा: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

नोटहरू

इलेक्ट्रोफोरेसिस समय धेरै लामो हुनु हुँदैन। सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिसको समयमा सुख्खा हुनु हुँदैन। HbA र HbA2 स्पष्ट रूपमा अलग भएपछि इलेक्ट्रोफोरेसिस रोक्नुहोस्। लामो समयसम्म इलेक्ट्रोफोरेसिसले ब्यान्ड प्रसार र धमिलो हुन सक्छ।

धेरै नमूना प्रयोग नगर्नुहोस्। अत्यधिक हेमोग्लोबिन तरलले ब्यान्ड डिटेचमेन्ट वा अपर्याप्त दाग निम्त्याउन सक्छ, परिणामस्वरूप झूटा रूपमा उच्च HbA स्तरहरू।

प्रोटीन संग सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली को प्रदूषण रोक्नुहोस्।

वर्तमान धेरै उच्च हुनु हुँदैन; अन्यथा, हेमोग्लोबिन ब्यान्ड अलग नहुन सक्छ।

सधैं सामान्य व्यक्तिहरूबाट नमूनाहरू र आवश्यक ज्ञात असामान्य हेमोग्लोबिनहरू नियन्त्रणको रूपमा समावेश गर्नुहोस्।

बेइजिङ लिउई बायोटेक्नोलोजीले हेमोग्लोबिन इलेक्ट्रोफोरेसिसको लागि व्यावसायिक इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक निर्माण गर्दछ जुन मोडेल हो।DYCP-38Cसेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक, र त्यहाँ सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांकको लागि उपलब्ध इलेक्ट्रोफोरेसिस पावर सप्लाईका दुई मोडेलहरू छन्।DYY-2CरDYY-6Cबिजुली आपूर्ति।

यस बीच, बेइजिङ Liuyi बायोटेक्नोलोजी ग्राहकहरु को लागी सेलुलोज एसीटेट झिल्ली प्रदान गर्दछ, र सेलुलोज एसीटेट झिल्ली को आकार अनुकूलित गर्न सकिन्छ। नमूनाहरू र थप जानकारीको लागि हामीलाई सोध्न स्वागत छ।

बेइजिङ लिउई ब्रान्डको चीनमा ५० वर्षभन्दा बढी इतिहास छ र कम्पनीले विश्वभर स्थिर र उच्च गुणस्तरका उत्पादनहरू उपलब्ध गराउन सक्छ। विकास को वर्ष को माध्यम बाट, यो आफ्नो छनोट को योग्य छ!

हामी अब साझेदारहरू खोजिरहेका छौं, दुबै OEM इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक र वितरकहरूलाई स्वागत छ।

यदि तपाईंसँग हाम्रा उत्पादनहरूको लागि कुनै खरिद योजना छ भने, कृपया हामीलाई सम्पर्क गर्न नहिचकिचाउनुहोस्। तपाईले हामीलाई इमेलमा सन्देश पठाउन सक्नुहुन्छ[इमेल सुरक्षित]वा[इमेल सुरक्षित], वा कृपया हामीलाई +86 15810650221 मा कल गर्नुहोस् वा Whatsapp +86 15810650221, वा Wechat: 15810650221 थप्नुहोस्।