सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली इलेक्ट्रोफोरेसिस द्वारा सीरम प्रोटीन अलग गर्न को लागी प्रयोग

सिद्धान्त

सेल्युलोज एसीटेट फिल्म इलेक्ट्रोफोरेसिस एक इलेक्ट्रोफोरेसिस विधि हो जुन सेलुलोज एसीटेट फिल्मलाई समर्थनको रूपमा प्रयोग गर्दछ। विद्युतीय क्षेत्रको कार्य अन्तर्गत चार्ज गरिएका कणहरू विपरीत इलेक्ट्रोड तर्फ सर्ने घटनालाई इलेक्ट्रोफोरेसिस भनिन्छ। प्रत्येक प्रोटीनको एक विशिष्ट आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दु भएको हुनाले, यदि प्रोटिनलाई यसको आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दु भन्दा कम pH भएको समाधानमा राखिएको छ भने, प्रोटीन सकारात्मक रूपमा चार्ज हुनेछ र नकारात्मक इलेक्ट्रोड तर्फ सर्नेछ। यसको विपरीत, यो सकारात्मक ध्रुवमा सर्छ। किनभने विद्युतीय क्षेत्रमा चल्ने प्रोटीन अणुहरूको गति तिनीहरूको चार्ज, अणुहरूको आकार र आकारसँग सम्बन्धित छ, विभिन्न प्रोटीनहरूलाई इलेक्ट्रोफोरेसिसद्वारा अलग गर्न सकिन्छ। सीरमले विभिन्न प्रकारका प्रोटिनहरू समावेश गर्दछ, ती सबैमा pH7.5 वा कममा आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दुहरू छन्। जब सीरमलाई इलेक्ट्रोफोरेसिस चलाउन pH 8.6 बफरमा राखिन्छ, सबै सीरम प्रोटिनहरू नकारात्मक रूपमा चार्ज हुन्छन् र विद्युतीय क्षेत्रमा सकारात्मक पक्षमा सर्छन्। विभिन्न सीरम प्रोटिनहरूमा एउटै pH मा फरक फरक चार्ज भएको हुनाले, आणविक कणहरू आकारमा फरक हुन्छन्, र यसरी माइग्रेसन गति फरक हुन्छ, र तिनीहरू इलेक्ट्रोफोरेसिसद्वारा विभाजित हुन्छन्। सीरम प्रोटीनहरूको आइसोइलेक्ट्रिक बिन्दुहरू र आणविक वजनहरू तलको तालिकामा देखाइएको छ:

प्रयोग भनेको रगतको सीरममा विभिन्न प्रोटिनहरूलाई सेल्युलोज एसीटेट झिल्ली (abbr. CAM) लाई सपोर्ट मिडियाको रूपमा अलग गर्नु हो। CAM एक प्रकारको फोम गरिएको लुस होeराम्रो वर्दीको साथ फिल्म, र मोटाई 0.1mm-1.5mm छ, जसमा निश्चित पानी अवशोषण छ।

CAM इलेक्ट्रोफोरेसिसका लागि सामग्री, उपकरण र अभिकर्मकहरू

नमूनाहरू:स्वस्थ मानव रक्त सीरम

साधन:बिजुली आपूर्ति DYY-6C, इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक DYCP-38C, उच्च नमूना लोडिंग WD-9404

अभिकर्मकहरू

1) सेलुलोज एसीटेट झिल्ली 7X9 सेमी

2) PH 8.6 बार्बिटोल बफर समाधान (आयनिक शक्ति 0.05-0.09, यो 0.06tid समय हो।): 1,84 ग्राम डाइथाइल बार्बिट्युरिक एसिड लिनुहोस्, र त्यसपछि 1.03 ग्राम डाइथाइल सोडियम पेन्टोबार्बिटल लिनुहोस्, घुल्नको लागि तातोमा केही डिस्टिल्ड पानी थप्नुहोस्, र बनाउनुहोस्। 1000ml सम्म;

3) दाग: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, 100ml आसुत पानी थप्नुहोस्;

4) TBS/T वा PBS/T: 45ml 95% इथेनॉल, 5ml ग्लेशियल एसिटिक एसिड, 50ml आसुत पानी थप्नुहोस्;

5) सफाई समाधान: 70ml निर्जल इथेनॉल, 30ml ग्लेशियल एसिटिक एसिड।

मेथो प्रयोग गर्नुहोस्d

1) झिल्ली तयार गर्नुहोस्: झिल्लीलाई बार्बिटोल बफर समाधान 30min-8h मा डुबाउनुहोस्, र यसलाई बाहिर निकाल्नुहोस्, शोषक कागज द्वारा अतिरिक्त समाधान हटाउनुहोस्।

2) नमूनाहरू लोड गर्दै: झिल्लीको नराम्रो पक्ष र चिल्लो छेउ छुट्याउन, र 1.5 सेन्टीमिटरको दूरीमा कुनै नराम्रो पक्षको शीर्ष छेउमा रेखा चिन्ह लगाउनुहोस्। नराम्रो पक्षमा उत्कृष्ट नमूना लोडिङ उपकरणद्वारा नमूनाहरू लोड गर्नुहोस्। नोट: नमूनाहरू झिल्लीको नराम्रो पक्षमा लोड हुनुपर्छ। सीरम नमूनाहरू झिल्लीमा पूर्ण रूपमा प्रवेश गरिसकेपछि, झिल्लीलाई घुमाउनुहोस्, नराम्रो पक्ष (नमूनाहरू सहित) ट्याङ्कीमा फेस गर्नुहोस्, र नमूनाहरूको साथ अन्त्य नकारात्मक इलेक्ट्रोडमा राखिएको छ।

3) इलेक्ट्रोफोरेसिस: बिजुली आपूर्ति खोल्नुहोस्, 0.4～0.6m A/cm झिल्ली, चलिरहेको समय 30-45 मिनेट हो। इलेक्ट्रोफोरेसिस चलाउँदा, पावर बन्द गर्नुहोस्।

4) दाग र सफा गर्नुहोस्: ट्याङ्कीबाट झिल्ली निकाल्नुहोस्, र डुबाउनुहोस्it 5 मिनेटको लागि डाई घोलमा राख्नुहोस्, र त्यसपछि पृष्ठभूमि रङ स्पष्ट नभएसम्म 3-4 पटक सफा गर्ने घोलमा सफा गर्नुहोस्। सीरम प्रोटिनहरू ब्यान्डहरूमा देखाइनुपर्छ, र सामान्यतया त्यहाँ पाँच क्षेत्रहरू छन्, चिन्हित रेखाको माथिल्लो छेउमा, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin।

5) संरक्षण: सुक्खा इलेक्ट्रोफोरेसिस राख्नुहोस्ब्यान्ड10-15 मिनेटको लागि घोल सफा गर्नुहोस्, र त्यसपछि यसलाई बाहिर निकालेर सफा गिलासमा टाँस्नुहोस्, यो सुकेपछि, यो पारदर्शी फिल्म बन्नेछ।ब्यान्ड.

प्रयोगनतिजा

सीरम नमूनाहरूको विभाजन प्रभाव राम्रो छ, र त्यहाँ कुनै ब्यान्ड टेलिङ घटना छैन। नतिजाहरूको दोहोरिने योग्यता परीक्षण प्रक्रियाहरू र प्रयोगकर्ताको विधिहरूको कारणले भिन्न हुन्छ, र पुनरावृत्ति उच्च छ।

निष्कर्ष

द्रुत क्लिनिकल इलेक्ट्रोफोरेसिस पत्ता लगाउने प्रणाली (इलेक्ट्रोफोरेसिस टैंकDYCP-38C,बिजुली आपूर्तिDYY-6C र उच्च नमूना लोडिङ WD-9404) हाम्रो द्वारा उत्पादितकम्पनी Beijing Liuyi बायोटेक्नोलोजी कं, लिमिटेडप्रयोगात्मक आवश्यकताहरू पूरा गर्दछ,रपरिणामहरू पुन: उत्पादन योग्य, सरल र छिटो, लागि उपयुक्त छन्शिक्षणअनुसन्धान.

बेइजिङ लिउईबायोटेक्नोलोजी कं, लिमिटेड जीवन विज्ञान उद्योग को लागी इलेक्ट्रोफोरेसिस उत्पादनहरु को निर्माण मा माहिर छ, जोचीनमा 50-वर्ष भन्दा बढी इतिहास छ र कम्पनीले विश्वभर स्थिर र उच्च-गुणस्तर उत्पादनहरू प्रदान गर्न सक्छ। विकास को वर्ष को माध्यम बाट, यो आफ्नो छनोट को योग्य छ!

हामी अब साझेदारहरू खोजिरहेका छौं, दुबै OEM इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक र वितरकहरूलाई स्वागत छ।

हाम्रो बारेमा थप जानकारीको लागि, कृपया हामीलाई इमेल मार्फत सम्पर्क गर्नुहोस्[इमेल सुरक्षित]वा[इमेल सुरक्षित].