1. वर्गीकरण
जेल इलेक्ट्रोफोरेसिसलाई ठाडो प्रकारहरू (स्तम्भ जेल र स्ल्याब जेलहरू सहित) र तेर्सो प्रकारहरू (मुख्य रूपमा स्ल्याब जेलहरू) (चित्र 6-18) मा विभाजित गरिएको छ। सामान्यतया, ठाडो विभाजन तेर्सो भन्दा थोरै उच्च हुन्छ, तर तेर्सो जेल तयारीमा कम्तिमा चार फाइदाहरू छन्: सम्पूर्ण जेलको मुनि समर्थन छ, कम-सांद्रता agarose को प्रयोग गर्न अनुमति दिदै; विभिन्न विशिष्टताहरूको agarose जेल प्लेटहरू तयार गर्न सम्भव छ; जेल तयारी र नमूना लोड अधिक सुविधाजनक छन्; इलेक्ट्रोफोरेसिस चेम्बर निर्माण गर्न सजिलो र लागत-प्रभावी छ। क्षैतिज इलेक्ट्रोफोरेसिस एगारोज जेल प्लेटको साथ इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरको सतह भन्दा लगभग १ मिमी तल पूर्ण रूपमा डुबेको हुनाले यसलाई जलमग्न इलेक्ट्रोफोरेसिस पनि भनिन्छ।
Agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसिसको लागि इलेक्ट्रोफोरेसिस टैंक DYCP-31DN
2. बफर प्रणाली
न्यूक्लिक एसिड विभाजनमा, अधिकांश प्रणालीहरूले निरन्तर प्रणालीहरू अपनाउछन्। सामान्यतया प्रयोग हुने इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरहरूमा TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L बोरिक एसिड, 0.0024mol/L EDTA) बफर र THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L) समावेश छन्। सोडियम एसीटेट, 0.0018mol/L EDTA) बफर। यी बफरहरू सामान्यतया 10x स्टक समाधानको रूपमा तयार हुन्छन् र प्रयोगमा हुँदा आवश्यक एकाग्रतामा पातलो हुन्छन्। agarose जेलमा रैखिक र गोलाकार DNA को माइग्रेसन दरहरू प्रयोग गरिएको बफरसँग भिन्न हुन्छन्। बफरमा, रैखिक DNA को माइग्रेसन दर गोलाकार DNA भन्दा ठूलो हुन्छ, जबकि TBE बफरमा, यसको विपरीत सत्य हो।
3. Agarose जेल को तयारी
(1) तेर्सो Agarose जेल को तयारी
(a) 1x इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर प्रयोग गरेर agarose जेल को आवश्यक एकाग्रता तयार गर्नुहोस्।
(ख) उमालेको पानीको नुहाउने ठाउँमा, चुम्बकीय स्टिररमा वा माइक्रोवेभमा विघटन गर्नको लागि अग्रोजलाई तताउनुहोस्। एगारोज घोललाई ५५ डिग्री सेल्सियसमा चिसो पार्नुहोस् र ०.५ μg/ml को अन्तिम सांद्रतामा इथिडियम ब्रोमाइड (EB) डाई थप्नुहोस्।
(c) गिलास वा एक्रिलिक प्लेटका किनारहरूलाई थोरै मात्रामा एगारोज जेलले बन्द गर्नुहोस्, कङ्घी थप्नुहोस्, र प्लेटको माथि ०.५ ~ १.० मिमी माथि कंघी दाँत राख्नुहोस्।
(d) पिघलिएको agarose जेलको घोललाई लगातार गिलास वा एक्रिलिक प्लेट मोल्डमा हाल्नुहोस् (मोटाई DNA नमूनाको भोल्युममा निर्भर गर्दछ), हावाका बुलबुलेहरूको परिचयलाई बेवास्ता गर्दै। यसलाई कोठाको तापक्रममा प्राकृतिक रूपमा ठोस हुन दिनुहोस्।
(ङ) पूर्ण ठोसीकरण पछि कन्घीलाई सावधानीपूर्वक हटाउनुहोस्। जेल ट्याङ्कीमा इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरको उपयुक्त मात्रा थप्नुहोस्, जेल प्लेट इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरको सतहभन्दा लगभग १ मिमी तल डुबेको छ भनी सुनिश्चित गर्नुहोस्।
(2) ठाडो Agarose जेल को तयारी
(क) इथानोलले धोएर गिलास प्लेटबाट ग्रीस वा अवशेष हटाउनुहोस्।
(b) अगाडि र पछाडि बाँधहरू बीच स्पेसर प्लेटहरू राख्नुहोस्, स्पेसर प्लेटहरूको किनारहरू अगाडि र पछाडि बाँधहरूसँग पङ्क्तिबद्ध गर्नुहोस्, र तिनीहरूलाई क्ल्याम्पहरूद्वारा सुरक्षित गर्नुहोस्।
(c) जेल कास्टिङ चेम्बरको तल्लो भागमा १ सेन्टीमिटर अग्लो एगारोज प्लग बनाउनको लागि स्पेसर प्लेटका किनाराहरू बीचको 1x बफरमा 2% agarose थप्नुहोस्।
(d) 1x बफरमा तयार गरिएको, माथिल्लो तल 1 सेन्टिमिटर सम्म जेल च्याम्बरमा पग्लिएको एगारोज जेललाई इच्छित एकाग्रतामा खन्याउनुहोस्।
(ङ) कंघी घुसाउनुहोस्, कंघी दाँत मुनि हावाका बुलबुले फसाउनबाट जोगिनुहोस्। कहिलेकाहीँ, एगारोज जेल चिसोको समयमा कंघी दाँतमा झुर्रियाँ देखा पर्न सक्छ; यस्तो अवस्थामा, यसलाई बलियो बनाउनको लागि माथिल्लो भागमा केही पिघलिएको अग्रोज थप्नुहोस्।
(f) कंघी हटाउनुहोस्। लोडिङ स्लटमा बफर चुहावट रोक्नको लागि, एगारोज जेल प्लेट र इलेक्ट्रोफोरेसिस चेम्बर बीचको जडानलाई २% एगारोजले सील गर्नुहोस् र आवश्यक मात्रामा बफर थप्नुहोस्।
(g) जेल च्याम्बरमा 1x इलेक्ट्रोफोरेसिस बफर थप्नुहोस्।
(h) DNA नमूनाहरू सावधानीपूर्वक बफरको मुनि रहेको agarose जेलमा लोड गर्नुहोस्।
agarose जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस बारे आधारभूत ज्ञानको बारेमा थप जानकारी, हामी अर्को हप्ता साझा गर्नेछौं। यी जानकारीहरू तपाईंको प्रयोगको लागि उपयोगी हुन चाहन्छन्।
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ले हाम्रो आफ्नै व्यावसायिक प्राविधिक टोली र R&D केन्द्रसँग ५० वर्षभन्दा बढी समयदेखि इलेक्ट्रोफोरेसिस उपकरण निर्माणमा विशेषज्ञता हासिल गरेको छ। हामीसँग डिजाइन देखि निरीक्षण, र गोदाम, साथै मार्केटिङ समर्थन सम्म विश्वसनीय र पूर्ण उत्पादन लाइन छ। हाम्रा मुख्य उत्पादनहरू इलेक्ट्रोफोरेसिस सेल (ट्याङ्क/चेम्बर), इलेक्ट्रोफोरेसिस पावर सप्लाई, नीलो एलईडी ट्रान्सिल्युमिनेटर, यूभी ट्रान्सिल्युमिनेटर, जेल छवि र विश्लेषण प्रणाली आदि हुन्।
हामी अब साझेदारहरू खोजिरहेका छौं, दुबै OEM इलेक्ट्रोफोरेसिस ट्यांक र वितरकहरूलाई स्वागत छ।
यदि तपाईंसँग हाम्रा उत्पादनहरूको लागि कुनै खरिद योजना छ भने, कृपया हामीलाई सम्पर्क गर्न नहिचकिचाउनुहोस्। तपाईले हामीलाई इमेलमा सन्देश पठाउन सक्नुहुन्छ[इमेल सुरक्षित]वा[इमेल सुरक्षित], वा कृपया हामीलाई +86 15810650221 मा कल गर्नुहोस् वा Whatsapp +86 15810650221, वा Wechat: 15810650221 थप्नुहोस्।
Whatsapp वा WeChat मा थप्न कृपया QR कोड स्क्यान गर्नुहोस्।
पोस्ट समय: डिसेम्बर-07-2023